荧光比分析,荧光分析测量方法

...用共聚焦显微镜自带软件检测细胞核和细胞质的荧光强度比例

年由Neil等报道的基于结构照明的显微术，是一种利用常规荧光显微镜实现光学切片的新技术，并可获得与共聚焦显微镜一样的轴向分辨率。

你通过电脑上的软件来看图的放大倍数就直接等于物镜的放大倍数。激光扫描共聚焦显微镜 （Confocal laser scanning microscope，CLSM）是近代最先进的 细胞生物 医学分析仪器之一。

目前，检测荧光探针的方法主要有单点测定和电荷耦合装置（CCD）荧光成像（包括用于微区分析的激光共聚焦荧光显微镜成像）。由于光电倍增管点扫描时间较长，激光照射强度高，很难抓住荧光早期变化。

与普通荧光显微镜相比激光共聚焦优势有：多重染色 1）多重染色时，各染料之间的cross-talk较少。

高中生物显微镜分电子显微镜和光学显微镜。电子显微镜比光学显微镜放大倍数大得多。光学显微镜可以观察到叶绿体线粒体等细胞器，以及有丝分裂染色体的变化，还有质壁分离。

激发光谱和荧光光谱比较,从荧光光谱机理上解释有什么结论

以相应的激发光波长为横坐标，作图，所作出的曲线就是该荧光物质的激发光谱。荧光发射光谱：固定第一单色皮波长，使激发光波长和强度保持不变，然后改变第二单色器波长，从200—700nm进行扫描，所获得的光谱为荧光光谱。

荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，但浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用，以及由于在液面附近溶液会吸收激发光，使发射光强度下降，导致发射光强度与浓度不成正比，故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。

由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长值，所以，可用它来鉴别各种荧光物质。可以依据绘制其激发光谱曲线时所采用的最大激发波长值来确定某荧光物质的分子荧光波长值和绘制荧光光谱曲线。

分子荧光分析比紫外-可见分光光度法选择性高的原因是()。

1、因为荧光或磷光分析法是在入射光的直角方向测定荧光强度，即在黑背景下进行检测，因此可以通过入射光强度，或者增大荧光或者磷光信号的放大倍数来提高灵敏度。

2、也就不能达到提高灵敏度的目的。所以，荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法高，般要高2~3个数量级。

3、而分光光度法的接收器与入射光在一条直线上，所以它是在亮背景下检测。因此荧光分析法比分光光谱法灵敏度高。分光光谱法的灵敏度一般只能检测到10克，两者相差三个数量级。

4、紫外吸收的入射光与检测器是在一条直线上的，检测器会受到入射光的干扰。荧光检测器与入射光成直角，基本不受入射光影响，所以灵敏度提高了。

5、因为与分子吸光光度法比较，萤光是从入射光的直角方向检测，即在黑暗背景下检测荧光的发射。分子吸光光度法中有入射光的背景干扰，因而分子荧光分析法的灵敏度通常比分子吸光光度法的要高2——4个数量级。

为什么荧光分析法比紫外可见法具有更高的灵敏度和选择性

1、你这里说的吸收光谱是什么类型的吸收光谱？ 红外吸收光谱？还是紫外-可见吸收光谱？如果是红外吸收光谱，那么主要原因是红外检测器的灵敏度普遍低于光电倍增管。如果是紫外-可见吸收光谱，那么它和荧光光谱的灵敏度是基本相当的。

2、持续时间短只有几纳秒至几微秒的时间，用于快速检测和分析反应动力学过程。空间分辨：具有很小的空间分辨力，用于检测微量物质的位置和分布情况。灵敏度高：检测到极微量的物质，可以达到ppb或ppm级别的灵敏度。

3、每一种物质都有自己特异的激发光波长和发射光波长，荧光法具有更高的选择性，在某种物质最大的激发光波长和发射光波长下，测量该物质具有更高的灵敏度。

4、某些物质的分子能吸收能量而发射出荧光，根据荧光的光谱和荧光强度，对物质进行定性或定量的方法，称为荧光分析法。

The End